PRÁCTICA 18. BILIRRUBINA TOTAL

BILIRRUBINA TOTAL 

FECHA: 18/01/2018

OBJETIVO:

Realizar la bilirrubina total mediante el método Jendrassik-Grofby.

UTILIDAD CLÍNICA:

La bilirrubina se origina por degradación del grupo hemo de la hemoglobina, que a su vez aparece en el plasma como consecuencia de la destrucción de los glóbulos rojos en el sistema retículo endotelial.
FUNDAMENTO:

Casi todas las técnicas de cuantificacion de la bilirrubina se basan en la reacción de Malloy-Evelyn que valora colorimetricamente por la formación de azobilirrubina, de color rojo cereza, cuando a la bilirrubina se le hace reaccionar en determinadas condiciones con el ácido sulfanilico diaztado.

La bilirrubina conjugada, muy polar, reacciona en medio acuoso con el reactivo de diazotacion, por lo que se le llamo directa , pues al poner en contacto el suero y el reactivo aparecía directamente el color. Sin embargo, la bilirrubina libre, poco polar, no da directamente la reacción y es preciso añadir un tercer reactivo -que inicialmente fue el metanol- para que produzca la reacción de diaztocacion con la consiguiente aparición del color, por este motivo se llamo bilirrubina indirecta

APARATAJE:

Espectrofotómetro

MATERIALES:

Suero
Tubos de ensayo
Gradillas
Pipetas automáticas
Puntas de pipeta
Cubetas
Gradillas de cubetas

REACTIVOS:

R1 ( BILIRRUBINA TOTAL)
R2 ( NITRITO DE SODIO )

PROCEDIMIENTO:

1.Encendemos el espectrofotómetro y ajustamos. Atemperar reactivos y muestra.

2.Rotulamos 2 tubos con blanco total y total. Añadimos:

3. Mezclar e incubar exactamente 5 minutos a 15-25 ºC.

4. Leer absorbancia (A) 555nm. 

 

RESULTAMOS:

-BLANCO TOTAL:0,017

-MUESTRA: 0,123

0,123-0,017x22= 2,33mg/dl bilirrubina total.