-PRÁCTICA 4.DETERMINACIÓN DE LA GLUCEMIA POR MÉTODO DE LA OXIDASA-PEROXIDASA.
FECHA:05/10/2017
OBJETIVO
El objetivo de esta práctica es la medición de la glucosa en suero o plasma por un método cuantitativo.
UTILIDAD CLÍNICA
Utiliza la espectrofotometría para la determinación de la glucosa.Durante el ayuno, los niveles normales de glucosa oscilan entre 70 y 100 mg/dL.
FECHA:05/10/2017
OBJETIVO
El objetivo de esta práctica es la medición de la glucosa en suero o plasma por un método cuantitativo.
UTILIDAD CLÍNICA
Utiliza la espectrofotometría para la determinación de la glucosa.Durante el ayuno, los niveles normales de glucosa oscilan entre 70 y 100 mg/dL.
Cuando la glucemia es inferior a este umbral se habla de hipoglucemia; cuando se encuentra entre los 100 y 125 mg/dL se habla de glucosa alterada en ayuno, y cuando
supera los 126 mg/dL se alcanza la condición de hiperglucemia.
FUNDAMENTO
La glucosa es la mayor fuente de energía para las células del organismo. Las insulinas facilitan la entrada de glucosa en las células.
La diabetes mellitus es una enfermedad que cursa con una hiperglucemia, causada por el déficit de insulina.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.
La glucosa es la mayor fuente de energía para las células del organismo. Las insulinas facilitan la entrada de glucosa en las células.
La diabetes mellitus es una enfermedad que cursa con una hiperglucemia, causada por el déficit de insulina.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.
La glucosa oxidasa cataliza la oxidación de glucosa a ácidoglucónico.
El H2O2 producido se detecta mediante un aceptor cromogénico de O2, fenol-ampirona en presencia de peroxidasa.
Β-D-Glucosa + O2 + H2O------ Ácido glucónico + H2O2
H2O2C+ Fenol + Ampirona--------------- Quinona + H2O
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de glucosa presente en la muestra ensayada.
El H2O2 producido se detecta mediante un aceptor cromogénico de O2, fenol-ampirona en presencia de peroxidasa.
Β-D-Glucosa + O2 + H2O------ Ácido glucónico + H2O2
H2O2C+ Fenol + Ampirona--------------- Quinona + H2O
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de glucosa presente en la muestra ensayada.
-Espectrofotómetro
MATERIAL
-Cubo de sucio -Suero -Orina
-Pipetas manuales y automáticas -Gradillas -Auxiliar de pipeteo
-Cubetas de 1,0cm de paso de luz
REACTIVOS
R1 Tampón ( tris ph 7,4 , Fenol)
R2 Enzimas ( Glucosa oxidasa, peroxidasa, 4.AF)
Glucose CAL
PROCEDIMIENTO
1.Añadimos unas gotas de R1 al bote de R2 agitamos durante unos minutos y lo echamos todo en el bote de R1.
2.Rotulamos los tubos de ensayo.
3.En cada tubo añadimos un 1ml/1000yl con una pipeta automática de RT.
4.En el tubo rotulado con patrón, añadimos 10yl de este.
5.En el tubo rotulado con muestra, añadimos 10yl de esta.
6.Introducir en el baño para incubar 10minutos a 37ºC.
7. Medimos en el espectrofotómetro, previamente se ha encendido. Ajustamos el espectro con la longitud de onda que nos dan en este caso 505nm.
-Lo primero que haremos será poner el espectro a “0”, esto se hace midiendo una de las cubetas con agua destilada, meteremos la cubeta en su lugar, cerramos la tapa, presionaremos el botón donde aparezca “ Medir blanco”, una vez se encuentre en 0,000 podremos medir las muestras y tubo problema.
-Para medir las muestras y el tubo PB; vaciamos la solución en la cubeta de espectrofotometría, colocamos en el aparato cerramos la tapa y lo mide automáticamente, hacer igual para medir el tubo PB.
RESULTADOS
-MUESTRA: 0,320
-TPB:0,339
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