PRÁCTICA 22. ESTUDIO DE HECES.

PRÁCTICA 8.SEPARACIÓN DE UNA MEZCLA DE AMINOÁCIDOS POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA.

                                    FECHA:25/10/2017
OBJETIVO
Realizar una separación e identificación de los aminoácidos triptófano, alanina,valina y arginina presentes en una muestra mediante una cromatografía de capa fina ascendente.

UTILIDAD CLÍNICA

La cromatografía en capa fina es una técnica analítica rápida y sencilla, muy utilizada en un
laboratorio de Química Orgánica. Entre otras cosas permite:

• Determinar el grado de pureza de un compuesto. Se puede determinar así, por ejemplo, la efectividad de una etapa de purificación.
• Comparar muestras. Si dos muestras corren igual en placa podrían ser idénticas. Si, por el contrario, corren distinto entonces no son la misma sustancia.
• Realizar el seguimiento de una reacción. Es posible estudiar cómo desaparecen los reactivos y cómo aparecen los productos finales o, lo que es lo mismo, saber cuándo la reacción ha acabado.

FUNDAMENTO

La muestra a analizar se deposita cerca de un extremo de una lámina de plástico o aluminio que previamente ha sido recubierta de una fina capa de adsorbente (fase estacionaria).

Entonces, la lámina se coloca en una cubeta cerrada que contiene uno o varios disolventes mezclados (eluyente o fase móvil). A medida que la mezcla de disolventes asciende por

capilaridad a través del adsorbente, se produce un reparto diferencial de los productos presentes en la muestra entre el disolvente y el adsorbente Aminoácido es una

molécula orgánica con un grupo amino (-NH2) y un grupo carboxilo (-COOH).1​ Los aminoácidos más frecuentes y de mayor interés son aquellos que forman parte de las proteínas.

APARATOS
-Estufa

MATERIAL
-Láminas de gel de celulosa
-Muestra problema conteniendo una mezcla desconocida de aminoácidos.
-Muestra patrón de aminoácidos.
-Cubeta o tarro d cristal
-Micropipeta
-Atomizador.

REACTIVOS
-Disolvente de cromatografía
-Disolución reveladora

PROCEDIMIENTO
1.Cortamos por la mitad la lámina de gel de celulosa. (La placa se debe manipular con guantes y cogiéndola por los bordes ya que las huellas de los dedos podrían aparecer posteriormente como confusas manchas coloreadas.)
2.Hacemos una línea horizontal a 1,5cm del borde y dos puntos de aplicación  separados entre si  a 1cm.

3.Con una punta de pipeta mojamos la muestra y la aplicamos en el punto de la   Derecha y con otra punta de pipeta mojamos en la PB y aplicamos en el punto   Izquierdo.

4.Dejamos que se sequen los puntos , metemos la lámina en un vaso de precipitado  y añadimos la fase móvil sin que toque los puntos, echar mas o me nos hasta los 0,5cm de la lámina y tapar para evitar que se evapore.

( si hiciera falta se le añade más fase móvil)

   

5.Sacamos la lámina, señalamos con un lápiz hasta donde a llegado la fase móvil y rotulamos.
6.Pulverizar la lámina con Nidrino en la calle , metemos en la estufa unos minutos y se vera los aminoácidos separados.

   

7.Medimos la raya de abajo hasta donde llega el disolvente 3,1cm.
Rf = mancha/disolvente
8.Medimos desde la raya de abajo hasta mitad de la mancha.
1ºmancha : 2cm
2ºmancha: 2,2cm       
3ºmancha: 1,7cm
4ºmancha: 1cm

RF1  2/3,1= 0,65

RF2  2,2/3,1= 0,71

RF3  1,7/3,1= 0,55

RF4  1/3,1=0,32