PRÁCTICA 15. UREA-B

UREA-B

Fecha:09/01/2018

OBJETIVOS:

Determinar la cantidad de ureasa por métodos enzimáticos colorímetros.

UTILIDAD CLÍNICA:
La ureasa cataliza la hidrólisis de la urea, presente en la muestra, en amoniaco y anhídrico carbónico.
Los iones de amonio reaccionan con salicilato e hipoclorito en presencia del catalizador nitroprusiato para formar un indofenol verde.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de urea en la muestra ensayada.

FUNDAMENTOS:
La urea es el resultado final del metabolismo de las proteínas; se forma en el hígado a partir de su destrucción.
Puede aparecer la urea elevada en sangre (uremia) en dietas con exceso de proteínas, enfermedades renales, insuficiencia cardíaca, hemorragias gástricas, hipovolemia y obstrucciones renales.

APARATAJE:
Espectrofotómetro

MATERIALES:

Cubetas
Tubos de ensayo
Pipetas automáticas
Puntas de pipetas
Baño María
Gradillas
Patrón
Suero o plasma

REACTIVOS:
RT (R1 + R3)
R2

PROCEDIMIENTO:

1.Encender el espectrofotómetro y ajustarlo. Atemperar la muestra y reactivos.
2.Rotulamos 3 tubos con los nombres de blanco ,muestra y patrón. Añadimos en cada uno de ellos:

	Blanco	Patrón	Muestra
RT (mL)	1.0	1.0	1.0
Patrón (micro-L)	--	10	--
Muestra (micro-L)	--	--	10

3. Homogeneizar e incubar 5 minutos a 37 ºC



4.Pipetear, en los tubos:

	Blanca	Patrón	Muestra
R2 ( mL)	1.0	1.0	1.0

5. Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC.

6.Leer la absorbancia del patrón y la muestra, frente al
blanco de reactivo. A una longitud de onda 580 nm.

OBSERVACIONES:
Esta práctica tuvimos que repetirla ya que hicimos un mal pipeteo y la coloración e las soluciones aumento demasiado. Y los el resultado final no era coherente 408,20 mg/dl de urea en la muestra.

RESULTADOS:
Absorbancias:
-Blanco: 0,000
-Patrón: 0,363
-Muestra: 0,625
0,625/0,363x50= 86,22 mg/dl de urea en la muestra.